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TECHNICAL ARTICLES
更新時間:2026-06-02
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針對不同降解程度,方法不同,?核心原則是:能重新提取就優先重新提取,無法重新提取再選富集補救?,具體方案如下:
1. 絕大多數情況(可獲取新鮮組織):重新規范提取+分裝凍存,是100%有效的方法
因為已經降解的蛋白無法復原,哪怕富集也只能得到部分完整靶標,重新提取能從源頭避免降解,只要操作規范就能得到穩定的靶標,這是最的解決方法,具體操作只要抓住2個關鍵點:
全程冰上操作,裂解液加足量蛋白酶抑制劑,提取后立即用膜蛋白試劑盒富集ACA11;
按單次實驗用量分裝成小份,-80℃凍存,避免反復凍融。
2. 無法重新取材(僅輕度-中度降解):?膜片段靶標富集法?
相比補加蛋白酶抑制劑、增加上樣量,膜片段富集能特異性回收100~120kDa區間的完整ACA11,去除降解產生的小片段雜蛋白,有效信號提升更明顯:
它能把完整靶標的濃度提升2~3倍,比單純增加上樣量的信噪比更高,背景更低;
只要樣本仍有少量完整ACA11殘留,大概率能檢出清晰的目標條帶,補救成功率能達到60%~70%,遠高于其他補救方法。
3. 重度降解:任何補救方法都無效,必須重新提取
如果內參已經彌散或無條帶,說明絕大多數蛋白已經降解,哪怕富集也得不到有效靶標,不用嘗試其他方法,直接重新取材更節省時間。